Jesse Eisenberg est né dans le Queens à New York. Sa mère Amy était clown et son père Barry Eisenberg a travaillé dans un hôpital avant de devenir professeur dans un collège. Sa famille, juive, est originaire de Pologne et d'Ukraine. Il débute sa carrière à l'âge de 16 ans dans la série La Famille Green aux côtés d'Anne Hathaway mais la série s'arrête à la fin de la première saison. Ce n'est qu'en 2008 que Jesse se fait réellement connaître pour son rôle dans Adventureland puis dans Bienvenue à Zombieland en 2009. Il incarne en 2010 le fondateur de Facebook Mark Zuckerberg dans le film The Social Network de David Fincher, rôCette dernière lui a d'ailleurs valu une nomination aux Oscars.le pour lequel sa performance a été largement saluée par la critique.